PCR - kraftfull snabbmetod
Polymeraskedjereaktion (PCR) är den mest kraftfulla metod för industriellt bruk som finns för att säkerställa snabb detektering av patogena bakterier. Tack vare sin höga specificitet är PCR tekniken den enda metod som garanterar ett tillförlitligt resultat inom 24 timmar eller mindre.
Amplifiering av DNA
PCR bygger på amplifiering av en mycket specifik DNA-sekvens, kallad målsekvens, tillhörande de bakterier som testas. I närvaro av ett särskilt enzym, Taq-polymeras, och specifika primers (korta trådar av DNA som kompleterar en del av målsekvensen), dupliceras målsekvensen genom en cykel av olika temperaturer. Dessa cykler upprepas 40-50 gånger, vilket amplifierar ursprungligt mål DNA exponentiellt.
Snabbare upptäckt
I realtids-PCR, i motsats till konventionell PCR så kombineras detektions steget med förstärkning: den förstärkta mål-nukleinsyra visualiseras i realtid som en fluorescerande signal. Denna signal genereras vid varje PCR-cykel endast när en specifik oligonukleotid sond, kopplat till en fluoroforen, hybridiseras med förstärkta mål-DNA. Eftersom mängden förstärkta DNA ökar med varje omgång av förstärkning, ökar fluorescensintensitet också. Den optiska modulen i ett realtids-PCR-instrument detekterar fluorescens-signalen under varje PCR-cykel. Med programvara erhålls en graf över fluorescensintensiteten kontra antal cykler.
Realtids-PCR kvantifiering
Realtids-PCR kvantifiering är ett genombrott metod för noggrann bestämning av mängden av en mål-DNA-sekvens i ett livsmedel eller vattenprov. Det specifika mål-DNA-sekvens från organismen eller beståndsdel för att upptäckas förstärks av realtids-PCR med hjälp av en automatiserad process. Antalet kopior av denna sekvens, som är relevanta för närvaro och graden av förorening genom organismen eller komponent, beräknas automatiskt utan krav på ytterligare åtgärder.
